Категории
Страны
МЕДИЦИНА И
ФАРМАЦЕВТИКА

КАТАЛОГ
МЕДИЦИНСКИХ САЙТОВ
www.med-catalog.com
Добавить сайт Добавить статью Правила Сайты по категориям Сайты по странам Сайты по городам  

Аллергические заболевания 44 (10)
Аптеки 48 (11)
Больницы, госпитали, клиники, центры, учреждения 361 (72)
Венерические заболевания 25 (3)
Витамины, минералы, биодобавки 98 (37)
Гинекология, маммология 107 (42)
Гомеопатия, траволечение, аромотерапия 52 (10)
Детские заболевания 53 (12)
Диагностика 161 (37)
Доноры 5 (2)
Желудочно-кишечный тракт 66 (25)
Заболевания опорно-двигательного аппарата 83 (22)
Кожные, венерические заболевания 59 (22)
Консультанты 108 (8)
Контрацептивы 11 (6)
Косметология 132 (50)
Лекарства, медикаменты, препараты 146 (57)
Лекарственные травы, природные средства 78 (22)
Медицинская литература 92 (11)
Медицинское оборудование 15 (1)
Наркология, анонимное лечение 86 (20)
Народная медицина 91 (25)
Нетрадиционная медицина 113 (34)
Онкология 20 (26)
Офтальмология, коррекция зрения 54 (13)
Предметы и средства гигиены 23 (9)
Приборы, инструменты 136 (23)
Протезирование, ортопедия 58 (9)
Психологи 82 (16)
Расходные материалы 54 (4)
Салоны красоты 66 (26)
Сексуальные расстройства 41 (5)
Сердечно-сосудистые заболевания 64 (18)
Скорая помощь 22 (7)
Стоматология 204 (28)
Суррогатное материнство 16 (4)
Сырье для медицины и фармацевтики 23 (2)
Узи, рентген, томография 64 (8)
Урологические заболевания 78 (11)
Услуги 203 (30)
Ухо, горло, нос 61 (13)
Уход за больными, сиделки 17 (2)
Хирургия 23 (3)
Другие сайты по медицине 230 (36)


Также рекомендуем посетить:

Кожные, венерические заболевания

Стандартизация уколов иглами и оценка новых перчаток G-VIR

Россия - Москва

В качестве маркера в желатиновой модели in vitro использовали вирус Herpes simplex I типа (HSVI), являющийся моделью вируса с оболочкой. Было показано, что из изученных экспериментальных параметров наибольшее влияние оказывают диаметр иглы и глубина прокола, в то время как скорость прокалывания, угол прокола и степень растяжения перчатки имеют меньшее значение. Одна перчатка уменьшает количество попадающей крови на 52% по сравнению с уколом без перчаток; надевание двух перчаток не дает дополнительной защиты от уколов полыми иглами. При стандартизированных условиях проколов хирургические перчатки G-VIR® снижают количество заносимого HSVI на 81% по сравнению с одинарными или двойными перчатками из латекса.


Введение

Медицинские работники озабочены возможностью случайного попадания крови зараженных вирусами пациентов. В настоящее время заражение вирусом гепатита В (HBV) может быть предотвращено вакцинацией, в то время как в отношении вируса иммунодефицита человека (ВИЧ) возможна лишь постэкспозиционная профилактика, а в отношении вируса гепатита С (HCV) эффективные профилактические меры отсутствуют. Среди всех несчастных случаев с попаданием крови, о которых сообщалось в литературе, максимальный риск связан с уколами иглами. Этот риск оценивается в 0,5 – 3% для HCV и в 0,3% для ВИЧ 1,2.



Для предупреждения попадания крови и жидкостей тела рекомендуется защита рук, но вопрос об эффективности в отношении проколов одинарной или даже двойной системы перчаток часто остается открытым. Резиновые перчатки не защищают от проникновения иглы в кожу, и эффективность таких «пассивных» слоев в предупреждении передачи вируса связана с очищением внешней поверхности прокалывающего кожу устройства. Это относится в первую очередь к устройствам с простой геометрией, например, с шовными иглами, но это «вытирающее» действие становится неэффективным в случае глубоких проколов полыми иглами или повреждений другими острыми предметами вроде лезвий скальпеля, пористых костных фрагментов и т. п. Для обеспечения более высокого уровня защиты были разработаны перчатки G-VIR® с включением капельного слоя жидкого дезинфицирующего средства, заключенного между двумя механическими слоями. При случайном проколе или разрезе высвобождение этой жидкости в месте повреждения обеспечивает защиту в результате значительного уменьшения количества заносимых вирусов 4,5.



Основным фактором риска является количество инокулируемых вирусов, прямо связанное с вирусной нагрузкой пациента и с объемом случайно внесенной крови 6. Для создания репродуцируемого теста, моделирующего несчастный случай с уколом полой иглой при точном контроле экспериментальных параметров, мы разработали автоматизированный аппарат для проколов с возможностью количественного определения in vitro заносимых вирусов. Мы представляем результаты первоначальной серии экспериментов с использованием в качестве «маркера» вируса herpes simplex (HSVI). Цель экспериментов – изучение основных факторов, влияющих на объем заносимой крови (глубины прокола, диаметра иглы, скорости и угла прокалывания, толщины перчаток и степени их растяжения). Определенные в экспериментах «стандартизированные» условия затем использовали для оценки защитных свойств перчаток G-VIR® в сравнении с перчатками других производителей с использованием HSV1 как модели вирусов с оболочкой, к которым относятся вирусы ВИЧ и HCV5.



Методика



Перчатки

Использовали три типа перчаток: перчатки G-VIR® - синтетические хирургические перчатки без талька (фирма Hutchinson Santé, Франция), содержащие жидкий дезинфектант (четвертичные соли аммония и хлоргексидин) внутри микроскопических капель, равномерно распределенных в слое толщиной 500 нм, два типа перчаток, предоставленных Hutchinson Santé, сходных с G-VIR®, но без дезинфектанта внутри, и стандартные латексные хирургические перчатки (Dermotact®, Wuhrlin Soplamed, Courbevoie, Франция) одинарной (250 нм) или двойной (500 нм) толщин.



Культуры клеток

Клетки Vero (ECACC № 84113001, ATCC, UK) культивировали на модифицированной по Дюльбекку среде (Sigma, Saint Quentin Fallavier, Франция) с добавлением L-глутамина, антибиотиков и 10 %-ной фетальной сыворотки теленка (Gibco, Paiseley, Великобритания). Монослои клеток выращивали в термостате (37 °С, 5% СО2). При пересевах первичных культур клетки отделяли с помощью 0,1%-ного раствора трипсин/ЭДТА. Среду меняли каждые три дня.



Штамм вируса

Использовали штамм Bey HSV1, культивируемый на клетках Vero. Инфицированные монослои собирали тогда, когда цитопатогенный эффект вируса был выражен у всех клеток. После трех циклов замораживания – оттаивания вирус гомогенизировали и сохраняли до использования с клеточным детритом в ростовой среде при –74 °С. Инфекционный титр, определяемый стандартным методом бляшек, выражали в содержании бляшкообразующих единиц (БОЕ/мл) 7. Во всех экспериментах использовали вирусный раствор с 10 (6) БОЕ/мл, приготавливаемый 10-кратным разведением в дефибринированной крови овцы (AES Chemunex, Франция). Титр вируса определяли в начале и в конце экспериментов, и он сохранял стабильность. Один и тот же штамм вируса использовался во всех экспериментах.



Автоматизированный аппарат для уколов

Аппарат состоит из пневматического удерживающего иглу устройства и шприца, смонтированных на вертикальном направляющем устройстве, позволяющем производить точную установку глубины укола. Давление воздуха контролируется манометром; скорость укола можно изменять, регулируя воздушный поток.



Из тыльного слоя перчатки вырезали квадраты 8 х 8 см, которые закрепляли на жесткой рамке для контроля растяжения. Угол между иглой и образцом устанавливали в 90° или 45°, располагая образец горизонтально или под углом 45° по отношению к игле. Время пребывания иглы в среде инфектанта было не более 0,5 сек.



Тест с уколами

Полые иглы (MicroLance, Becton Dickinson, Fraga (Huesca), Испания) и катетеры Jelico, Medex, Haslingden, Великобритания) от 25G до 16G прикрепляли к шприцу вместимостью 1 мл (Terumo Europe, Leuven, Бельгия) погружали на 2 см в вирусную суспензию. Кровь засасывали через иглу в шприц и выливали, оставляя каплю крови на кончике иглы, после чего шприц закрепляли на аппарате для уколов.



Образцы перчаток прокалывали с заданными скоростью, глубиной и углом, не прилагая силы к поршню шприца. Переносимый объем крови собирали в микропробирку (Eppendorf AG, Hamburg, Германия), заполненную 1,2 мл накопительной среды DMEM. Среда была слегка желирована с помощью 4% (по весу) желатина (LPB1 50, Rousselot SAS, Courbevoie, Франция) для имитации кожного эффекта и во избежание капиллярного пассивного переноса.



После укола накопительная среда разжижалась при 37°С, после чего ее наносили на сплошной клеточный монослой, культивируемый в 60-мм чашке для культур тканей (Becton Dickinson). После двухчасовой инкубации (37°С, 5% СО2) к культуральной среде добавляли 1% человеческой сыворотки (Sigma) и инкубировали 3 дня, после чего проводили визуальный подсчет бляшек.



Для каждого условия эксперимента проводили по 15 уколов (по одному на микропробирку), используя для каждого укола новую иглу.



Калибровочная кривая объем/БОЕ

С целью установления соответствия количества бляшек и переносимого объема была построена калибровочная кривая, учитывающая клеточную реакцию в присутствии желатина и крови.



1 мкл желированной накопительной среды, содержащей 0,2 мкл вирусной суспензии в крови наносили на клеточный монослой для подсчета бляшек в ряду разведений от исходной вирусной суспензии в крови (титры от 105 до 5 х 106 БОЕ/мл). Затем число бляшек регистрировалось и сопоставлялось с количеством внесенных вирусов.



Данные анализов

Для каждого исследуемого параметра проводилось по три раздельных эксперимента. Средние значения по 45 полученным данным обрабатывали и выражали в 99,5%-ном доверительном интервале с использованием t-критерия Стьюдента. Для определения оказывающих значительное влияние на объем крови параметров различия средних оценивали с помощью программы анализа вариабельности ANOVA с использованием Statgraphics Plus (v5.1, Manugistics, Inc., Rockville, США). Уровень достоверности приняли P< 0.05. Если результаты представляли особый интерес, применялся регрессионный анализ.



Результаты



Выработка протокола

Сначала для определения влияния основных механических параметров на объем вносимой крови проводили эксперименты с применением широко распространенных инъекционных игл 22G. Если нет особых указаний, уколы проводили через одинарный слой перчатки.



Калибровочная кривая. Линейный регрессионный анализ связи числа бляшек с количеством внесенных вирусов показывает хорошее совпадение с графиком уравнения y=0,78x+20,6 (данные не показаны, R2=0.96, P= 0.022). Поскольку все уколы проводили с одним и тем же штаммом вируса, эта калибровочная кривая использовалась во всех экспериментах для определения объема крови как функции титра вирусной суспензии и подсчитанного числа бляшек.



Глубина укола (рис. 1а). Вносимый объем крови существенно увеличивается с увеличением глубины прокола (Р < 0,001): от 0,07± 0,02 мкл (при глубине 3 мм) до 0,24 ± 0,04 мкл (при глубине15 мм ). В данных пределах изменение объема было линейным (R2= 0.97, P= 0.0022). Глубина 6 мм рассматривалась как характерная для повреждений при глубоком уколе и была определена как стандартная.



Размер иглы (рис. 1b). Объем вносимой крови возрастает с увеличением наружного диаметра и диаметра канала иглы (Р < 0,001), варьируя от 0,048 ± 0,01 мкл (25G) до 0,47±0,07мкл (16G ). Результаты соответствуют уравнению..





© 2007 Все права защищены.